通常将糖原添加到乙醇沉淀中以提高回收率 。由于它没有化学活性,因此不会抑制任何下游反应 。然而,它会捕获核酸并与它们形成沉淀 。这将为您提供更明显的沉淀,并帮助您回收甚至少量的 DNA 或 RNA 。
虽然糖原没有化学活性,但它可能会干扰蛋白质-核酸相互作用 。在这种情况下,可能切换到另一个惰性载体作为替代品 。比如可以使用酵母 tRNA或超声处理的 DNA代替糖原,它们的市场价格也相对便宜,但它们具有生物活性,因此可能会在下游反应中引起问题 。如果有条件也可以选择无干扰的线性(聚)丙烯酰胺作为替代 。
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五、PMSF(苯甲基磺酰氟)
在蛋白质提取方案中,您经常会发现 PMSF 。它通过与胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和凝血酶等蛋白酶的活性位点丝氨酸残基特异性结合来抑制丝氨酸蛋白酶,从而抑制它们的功能 。它还可以阻断乙酰胆碱酯酶和硫醇蛋白酶,如木瓜蛋白酶 。
PMSF 在水中不稳定,因此应使用无水液体(例如乙醇、异丙醇或 DMSO)制备储备溶液 。PMSF普遍被认为是具有较强毒性的,它会 PMSF 抑制您体内的蛋白酶,所以在处理它时要小心 。
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六、洗涤剂
去污剂通常用于溶解疏水性蛋白质或分解细胞膜等脂质双层 。离子去污剂的头部带有净电荷,所以去污效果明显,但它们会使接触到的蛋白质发生变性 。
非离子洗涤剂的头部没有净电荷,也相对温和 。所以在蛋白质提取通常会选用非离子洗涤剂因为它们虽然会破坏细胞膜,但不会使提取的蛋白质变性 。
SDS(十二烷基硫酸钠)作为一种离子洗涤剂 。它可以裂解细胞,较常用于电泳 。它会使蛋白质变性并包裹蛋白质 。SDS 的负电荷比蛋白质的任何潜在电荷都要强得多,所以蛋白质在SDS凝胶电泳过程中都会向正极迁移 。
非离子去污剂的常见的主要有NP40、Triton X-100或Brij 35等 。它们都可用于裂解细胞而不会使细胞中的蛋白质变性 。另一种广泛使用的非离子去污剂是吐温 20(TWEN- 20) 。它通常用于蛋白质印迹,防止抗体的非特异性结合 。
资料来源: 苏州阿尔法生物实验器材 网
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